李幼斌1958年2月15日生于吉林长春。父亲是高级技工，月工资在90元左右。李幼斌家中姐姐李野萍是国家一级话剧演员，他还有一个弟弟和一个妹妹，都生活在老家长春。
李幼斌1958年2月15日生于吉林长春。父母都是当地钟表厂的工人，父亲是高级技工，月工资在90元左右。李幼斌在家中排行老二，姐姐李野萍是国家一级话剧演员，但两人从来没有同台演出过。他还有一个弟弟和一个妹妹，都生活在老家长春。
1963年，长春电影制片厂要拍一部名为《将军的儿子》的电影，选中了李幼斌，可惜的是，1966年“文革”的来临，让这部片子“流产”了，李幼斌与成为“童星”的机会擦肩而过。在长春市第11中学就读时还加入了学校话剧团。1974年，参演了一台关于学生生活的话剧《茂风华正》，被长春市文化教育局选中。1974年12月28日，李幼斌正式上班了，虽然这个月只干了3天，但还是领了半个月的工资，共计11元人民币。到70年代末，李幼斌已经能在剧团中承担比较重的戏份了。到了80年代初，他逐渐成为主演，参演了《救救她》等多部话剧。在话剧《新京末日》中扮演末代皇帝溥仪，演技也得到了广泛的好评。
1985年，李幼斌进入长春电影制片厂，并主演电影《死证》，27岁的他饰演一位40多岁的东北抗日联军的师长。1987年，李幼斌在电影《天谷》中担任男主角。
1988年，李幼斌在自己的第一部电视剧《她曾经是我的妻子》中扮演主角。1994年，在电视剧《潮起潮落》中饰演主角鲁明宽。
2000年，在《非常代价》中饰演马超。参演电影《横空出世》。
2004年在电影《惊涛骇浪》中饰演张子明，获得第9届华表百花最佳男演员奖提名。
2005年在电视剧《亮剑》中饰演李云龙，与童蕾、何政军、张光北等人合作。获得第23届中国电视金鹰奖观众喜爱的男演员奖 。
2006年，主演《闯关东》，与萨日娜、刘向京、朱亚文等人合作。
2007年，在电视剧《仁者无敌》中饰演皮德贵。
2009年，根据红色经典巨著《红日》改编的同名电视剧开播，李幼斌在剧中出演国民党高级将领张灵甫。
2010年，在谍战剧《旗袍》中饰演钱鹏飞，与马苏、王志文合作。同年在夏雨主演的电视剧《师傅》中饰演老铁。
2011年，在《国门英雄》中饰演关汉生，与史兰芽、张志坚、田子田合作。
2012年，参演《老严有女不愁嫁》，饰演的是爱女如命，对未来女婿挑剔万分的倔强岳父。
2013年，主演电影《雷锋的微笑》，与万思维、唐国强等人合作。同年在《爱的保镖》中饰演孙海山。
2015年3月，在《血战嫩江桥·1931》饰演抗战英雄马占山将军。
李幼斌的前妻是长春话剧院的演员张瑞琪，他们一起生活了20多年，2006年离婚。在2009年李幼斌曾透露自己有一个24岁的儿子。2010年3月与史兰芽的恋情曝光。
2015年2月10日下午，首部聚焦“见义勇为”题材的电视剧《别让我看见》在北京举办新闻发布会，活动中，李幼斌被中华见义勇为基金会授予形象大使的称号，他感慨“会付出所有的努力为见义勇为事业服务”。