细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核 中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在 0.14mol ／ L 氯化钠溶液中的溶解度相差很大，核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度，脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用 0 ． 14mol ／ L 氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对 DNA 的水解作用。 SDS( 十二烷基硫酸钠 ) 能使脱氧核糖核蛋白产生解聚作用，在含有脱氧核糖核蛋白的溶液中加入 SDS ， DNA 即与蛋白质分离开，用氯仿将蛋白质沉淀除去，而 DNA 溶解于水相，最后用冷乙醇将 DNA 析出，而获得纯化的 DNA 。在氯仿中加入少量异戊醇能减少操作过程泡沫的产生，并有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白，下层有机溶剂相维持稳定。 DNA 和 RNA 在波长 260nm 处有很高的吸收峰值，蛋白质则在 280nm 处有很高的吸收峰值。利用这个原理，测定纯化样品在 260nm 和 280nm 处的吸光度，可以推算出样品中 DNA 的浓度，并判断其纯度。在标准条件下，当 A260 ＝ 1 时，样品中双链 DNA 浓度为 50 μg/ml ，单链 DNA 浓度为 40 μg/ml 。纯净的 DNA 样品 A260/A280 的比值约为 1.8 ，样品中含有蛋白质或其它杂质，会使 A260/A280 的比值下降。掌握 DNA 分离纯化的原理和方法。熟悉台式离心机 的使用。掌握 DNA 定量技术。
在制备肝匀浆时 , 在进行。在冰浴中进行，全部操做过程注意抑制 RNase 活性。各步骤操作应力求准确，尽量减少中途核酸的丢失，保证定量测定的准确性。稀释后应该尽量使样品 A260 和 A280 处于 0.1-0.7 的范围内。操作步骤:1 ．肝匀浆制备：新鲜猪肝，用 0.9 ％ NaCI 洗去血液，除去结缔组织，剪碎，称取 4g 肝组织，加 4ml 0.14mol ／ L NaCl 溶液，匀浆器中研磨，制成肝匀浆。2 ．分离核蛋白：肝匀浆倒入试管中， 4000r/min 离心 5min ，上清弃去。沉淀加 2 m 1 0.14 mol/L NaCl 搅匀后再置匀浆器中研磨， 4000r/min 离心 5min ，上清弃去，沉淀重复上述操作，上清弃去，沉淀为 DNA- 蛋白质复合物。3 ．沉淀中加 0.14mol/L NaCl 2.0ml ，搅匀，滴加 5 ％ SDS 2.0m1 ，边加边搅， 60 ℃ 水浴 10 min( 不停搅拌 ) ，冷至室温，均匀分成两管为 Bl 、 B2 。4 ． B1 、 B2 管中各滴加氯仿 - 异戊醇液 4.0m 1( 边加边搅 ) ，搅至溶液颜色均匀， 3000r/min 离心 15min 。溶液分三层，上层液为水相 ( 含 DNA) ，中层为蛋白质沉淀，下层为有机相，吸取 B1 、 B2 上层液合倒于另一试管中。5 ．上清液加 95 ％冷乙醇 4.0m 1 ，混匀 ( 颠倒混匀法 ) ， 3000r/min 离心 15min ，去上清液，沉淀为纯化 DNA 。6 ． DNA 的溶解：沉淀中加入 0.1 mol/L NaOH 4.0ml ，搅拌溶解， 2000r/min 离心 10min ，上清液则为 DNA 水解液。7 ． DNA 的测定：用 0.1mol/L NaOH 将样品稀释到一定浓度，以 0.1mol/L NaOH 调零，测定样品的 A260 和 A280 ，计算出每克肝组织中的 DNA 含量，并判断纯化 DNA 的纯度。